2023.08.11

優化ELISA結果，穩健的洗滌技術是關鍵

酶聯免疫吸附分析（ELISA）是一種測量溶液中抗原濃度的常用方法，已被用於從HIV診斷和妊娠測試到更精細的抗體、抗原和蛋白質測量的各種應用中。它的檢測原理是基於固定在固相上的特異性抗體的結合，這些抗體的酶促反應產生可測量的讀數，進而量化溶液中的目標蛋白質。

因此，優化ELISA結果，洗滌是關鍵之一。

ELISA方案在每個反應步驟後包含多個洗滌循環，洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結果。

非接觸式微孔板樣品處理系統C.WASH通過離心力可以輕柔移除微孔板上的液滴，並完成液體分配步驟，在效率、時間、節約耗材等各方面有效提升ELISA洗滌環節。以下案例展示了C.WASH在ELISA工作流程中的應用：

案例一

使用C.WASH比較熒光素溶液填充的微孔板洗滌前後的熒光值以確定洗滌效率。定義一個洗滌循環為通過離心旋轉去除板中的液體，然後分配液體。

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圖1. C.WASH工作流程圖

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圖2. 在96孔板中以不同轉速進行一或兩次洗滌循環後的洗滌效率。圖中所示的值是從96個數據點得出的平均值。

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圖3. 在384孔板中以不同轉速進行一或兩次洗滌循環後的洗滌效率。圖中所示的值是從96個數據點得出的平均值。

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圖4. 以不同轉速旋轉後，96孔（綠色）和384孔（藍色）板中的殘余體積。圖中所示的值是從96個數據點得出的平均值。

實驗結論：

1.C.WASH僅在一個洗滌循環後即可實現非常高的洗滌效率（洗滌效率>99.5%）。

2.經過兩次洗滌循環後，C.WASH幾乎完全去除了熒光信號（洗滌效率>99.99%）。

案例二

使用ELISA試劑盒檢測受刺激的THP-1細胞分泌到上清中的TNF-α（一種調節免疫細胞活動的細胞因子），比較工作流程中C.WASH和手動清洗微孔板的洗滌效率。

圖5.手動清洗和C.WASH清洗工作流程圖

圖6.手動清洗（藍色）和C.WASH（綠色）清洗測量TNF-α濃度結果

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圖7. 兩種清洗方案TNF-α標準溶液的校準曲線

（手動清洗為藍色，C.WASH清洗為綠色），所示數據為三次測量得出的平均值。

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表1. 兩種方案中時間和移液槍頭消耗比較

實驗結果：

1.C.WASH與傳統的手動清洗相比，得到的實驗數據質量相當，但C.WASH大大減少了洗滌循環次數，不僅縮短實驗時間，也大量節省了試劑和槍頭消耗。

2.C.WASH自動化操作使實驗結果具有高度可重復性，清洗後液體殘留體積比傳統洗板機或手動拍板少10倍以上。低殘留體積導致背景信號減少，實驗數據質量更高。

C.WASH可以做什麽？

加快工作流程

在數秒鐘內即可從96、384和1536孔板中去除液體。

自動化操作

使用自動化設備（SILA2）實現工作流程的未來化。

避免交叉汙染

非接觸式去除液體減少了樣品與汙染物混合的機會，確保了測試過程中產生的數據準確可靠。